杏彩体育官网人牙龈成纤维细胞的成骨分化可抑制破骨细胞形成

杏彩体育官网牙龈成纤维细胞（GFs）是牙龈构造中最丰厚的细胞类型之一，它们通过出现细胞表基质（ECM）卵白来调整和维护构造的无缺性。它们还通过调整白细胞的细胞粘附、出现豪爽活性氧和诱导 T 细胞增殖来调整免疫和炎症反映。GFs 已被证实通过排泄白细胞介素-4（ IL-4）和骨扞卫素（OPG）来控造破骨细胞分解，了得了其正在强壮个别中的骨骼扞卫才具。另一方面，GFs 可能正在牙龈卟啉单胞菌等口腔病原体存不才诱导破骨细胞酿成。大凡来说，GFs 与边际细胞之间的这种串扰正在指引牙周构造炎症反映的强度方面起着至闭紧张的效用。

其它，GFs 正在分解成其他细胞类型（蕴涵成骨细胞样细胞）的潜力方面显示轶群性能性和可塑性。磋商证据，分解成骨细胞样细胞的 GFs 高度表告竣骨细胞闭系基因。通过这种格式，GFs 有帮于骨稳态。

因为这两个历程是否彼此影响尚不睬解，因而，荷兰阿姆斯特丹大学和阿姆斯特丹自正在大学合伙牙科学术中央团队磋商了 GFs 的成骨分解对其破骨细胞诱导才具的影响。简直地说，该磋商探求了成骨分解形态（由矿化水准反应）怎样影响 GFs 诱导破骨细胞前体分解为破骨细胞的才具。磋商功劳揭晓正在 CELLS 期刊题为“Osteogenic Differentiation of Human Gingival Fibroblasts Inhibits Osteoclast Formation”。

起首，为了设置渐渐矿化，将 GFs 分成四组培育 3 周，正在结果 1 周（min1）、2 周（min2）或整体 3 周（min3）内应用或不应用成骨培育基，成立对比培育基组（C）。通过 ALP 活性、钙浓度、扫描电子显微镜（SEM）、茜素红染色和定量 PCR（qPCR）评估矿化境况。

正在全盘条目下培育 21 天后细胞数目增均有所加。正在第21 天时，min3 条目下的细胞数目明显裁减（图1 A）。正在培育第 0 天和 21 天后衡量 ALP 活性。与第 0 天比拟，全盘境况下的酶活性均明显增多，并正在 GFs 显露于成骨培育基中光阴最长的 min3 组中到达最高水准（图1 B）。

然后，评估成骨分解的成纤维细胞的 Ca2+ 重积才具，展现 Ca2+ 浓度跟着光阴的推移显着增多，与其他条目比拟杏彩体育官网，浓度正在 min3 中最高（图1 C）。茜素红染色同样表明了这一点（图1 D）。

SEM 图像显示，跟着光阴的推移，矿化历程告捷实行。跟着长光阴显露于成骨培育基，矿物结节状机闭的数目和巨细从 C 组累积增多到 min3 组（图1 E）杏彩体育官网。SEM 进一步揭示，初始矿物重积（min1）普通正在细胞顶部，而不是正在重积的基质上，正在后期（min2 和 min3）更多地附着正在基质机闭上。

正在第 21 天时衡量早期成骨标记物 Runt 闭系转录因子2（RUNX2）、基质卵白 I 型胶原卵白（COL1A1）和晚期成骨标记物骨衔尾素（Osteonectin）的基因表达水准，并没有窥察到统计学上的明显不同（图1 F、G、H）。

总之，成骨结果证据，用成骨培育基培育长达 3 周会慢慢增多成骨参数，如钙重积测定所反应的矿物质重积。SEM 领悟进一步显示，跟着光阴的推移，结节状机闭增多。

接下来，将 GFs 与含有破骨细胞前体的表周血单核细胞（PBMCs）共培育3 周，检测破骨细胞酿成。‌TRAcP+ 多核细胞的数目是权衡骨罗致和破骨细胞活性的紧张目标，因而，正在第 42 天时打算拥有三个或更多细胞核的 TRAcP+ 多核细胞的数目（图2 A、B、C）。从对比组（C）到 min3 组，拥有 3-5 个或越过 6 个细胞核的细胞数目明显裁减（图2 B）。C 组和 min1 组破骨细胞酿成最高，min3 组最低，其成骨培育基预培育光阴最长（图2 B）。

正在第 28 天（与PBMCs 共培育1 周）和 42天（与PBMCs 培育3 周）时衡量 TRAcP 活性，展现差异光阴点之间和差异条目之间没有明显不同，TRAcP 活性水准一样（图2 C）。

因为 TNF-α 纵然正在没有诱导破骨细胞分解的 RANKL 境况下也能刺激破骨细胞酿成，因而，磋商职员进一步评估了 TNF-α 的开释是否受矿化机造的影响。总体而言，TNF-α 排泄正在第 35 天（与PBMCs 共培育2 周）明显高于第 28 天（与PBMCs共培育1 周）。正在这两个光阴点，长光阴显露于成骨培育基导致 TNF-α 排泄低重（图2 D）。

正在第 21 天和第 35 天（增加 PBMCs 后 14 天）衡量破骨细胞爆发闭系基因的表达，第21 天仅涉及共培育开头时 GFs 简单培育中的表达，第35 天反应了 GFs 和 PBMCs 的共培育中的表达。RANKL 正在 min3 组的表达明显更高，证据长光阴显露于成骨培育基会增多 RANKL 表达，但正在第 35 天时，两组间未窥察到明显不同。其它，OPG 水准也正在 min3 组最高，且正在这两个光阴点，OPG 水准都比 RANKL 高几倍。

破骨细胞酿成的另一个紧张分子是细胞间黏附分子-1（ICAM-1），它是 GFs 和 PBMCs 之间细胞间彼此效用所必须的，第 35 天时，min1 组的 ICAM-1 表达水准明显高于 min3 组；巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）卵白表达对破骨细胞前体的增殖至闭紧张，其同样正在 min1 组中最高；基质金属卵白酶（MMPs）通过限造细胞-基质彼此效用和融化骨基质对破骨细胞迁徙很紧张，然而，MMP-2 表达水准正在任何光阴点上都没有明显不同；转化滋长因子β（TGF-β）可替换 RANKL，阻断其信号通道会控造破骨细胞酿成，正在第21 天时，TGF-β 表达水准正在 min3 组最高；树突状细胞特异性跨膜卵白（DC-STAMP）被以为是细胞间交融的紧张基因，正在第 35 天时，其正在 C 组和 min2 组的表达存正在明显不同；TRAcP 是破骨细胞活性的标记物，其正在第 35 天时正在全数条目下水准一样。

t-PA、u-PA 及其受体 u-PAR 等纤维卵白融化因子正在骨代谢历程的调整中施展效用。这些因子介入破骨细胞前体向破骨细胞的分解，调整成骨细胞对破骨细胞分解的诱导才具，并导致成骨细胞矿化细胞表基质。这些要素的转变会影响成骨细胞和破骨细胞的性能。为此，尝试结果还磋商了 t-PA、u-PA 及其受体 u-PAR 的基因表达水准，展现第 21 天时，t-PA、u-PA 及其受体 u-PAR 表达均正在 min3 组最高。

这项磋商初次描摹了人类 GFs 的成骨分解对破骨细胞酿成诱导才具的影响。磋商起首证据 GFs 可能正在成骨刺激下得回成骨表型。其次，正在成骨培育基中培育光阴越长，GFs 破骨细胞诱导才具就越弱。GFs 已被证实可能分解成成骨细胞样细胞，以结节形势爆发钙重积。它们的分解水准低重了它们诱导破骨细胞的才具。这进一步证据，通过适应的刺激，GFs 有也许用于再生牙周诊治。因而，异日的磋商也许有帮于确定调整分解历程及其对破骨细胞酿成影响切实实机造和途径。